Mae Dithiothreitol (DTT) yn asiant lleihau a ddefnyddir yn gyffredin, a elwir hefyd yn ychwanegyn gwyrdd newydd.Mae'n gyfansoddyn organig moleciwlaidd bach gyda dau grŵp mercaptan (-SH).Oherwydd ei briodweddau lleihau a'i sefydlogrwydd, defnyddir DTT yn eang mewn arbrofion biocemeg a bioleg moleciwlaidd.
Prif rôl DTT yw lleihau bondiau disulfide mewn proteinau a biomoleciwlau eraill.Mae'r bond disulfide yn rhan bwysig o blygu a sefydlogrwydd protein, ond o dan rai amodau arbrofol, megis dadansoddiad SDS-TUDALEN reducible, ailgyfuno protein a phlygu, mae angen lleihau'r bond disulfide i ddau grŵp thiol i ddatrys strwythur gofodol y protein.Gall DTT adweithio â bondiau disulfide i'w lleihau i grwpiau mercaptan, gan agor strwythur gofodol y protein a'i wneud yn hawdd i'w ddadansoddi a'i drin.
Gellir defnyddio DTT hefyd i amddiffyn gweithgaredd ensymau a sefydlogrwydd.Mewn rhai adweithiau ensymau-gatalydd, gall yr ocsidydd leihau gweithgaredd yr ensym.Gall DTT adweithio ag ocsidyddion i'w lleihau i sylweddau diniwed, a thrwy hynny amddiffyn gweithgaredd a sefydlogrwydd yr ensym.
O'i gymharu ag asiantau lleihau traddodiadol fel β-mercaptoethanol (β-ME), ystyrir bod DTT yn asiant lleihau mwy diogel a mwy sefydlog.Mae nid yn unig yn sefydlog mewn hydoddiant dyfrllyd, ond mae hefyd yn cynnal ei briodweddau lleihau o dan amodau tymheredd uchel a sylfaen asid.
Mae'r defnydd o DTT yn gymharol syml.Yn gyffredinol, mae DTT yn cael ei ddiddymu mewn byffer priodol ac yna'n cael ei ychwanegu at y system arbrofol.Mae angen pennu'r crynodiad gorau posibl o DTT yn ôl yr arbrawf penodol, ac fe'i defnyddir yn gyffredinol yn yr ystod o 0.1-1mM.Gall crynodiadau is leihau effeithiau andwyol ar dwf celloedd a gallant leihau sytowenwyndra oherwydd gorfynegiant proteinau targed.Gall crynodiadau uwch achosi baich metabolig celloedd gormodol, gan effeithio ar dwf celloedd ac effeithlonrwydd mynegiant.
Y ffordd i bennu'r crynodiad gorau posibl yw gwerthuso lefel mynegiant y protein targed trwy gynnal profion sefydlu IPTG ar wahanol grynodiadau.Gellir cynnal profion diwylliant ar raddfa fach gan ddefnyddio ystod o grynodiadau IPTG (ee 0.1 mM, 0.5 mM, 1 mM, ac ati) a gellir gwerthuso'r effaith mynegiant ar wahanol grynodiadau trwy ganfod lefel mynegiant y protein targed (ee Western blotio neu ganfod fflworoleuedd).Yn ôl y canlyniadau arbrofol, dewiswyd y crynodiad gyda'r effaith mynegiant gorau fel y crynodiad gorau posibl.
Yn ogystal, gallwch hefyd gyfeirio at y llenyddiaeth berthnasol neu brofiad labordai eraill i ddeall yr ystod crynodiad IPTG a ddefnyddir yn gyffredin o dan amodau arbrofol tebyg, ac yna optimeiddio ac addasu yn unol â'r anghenion arbrofol.
Mae'n bwysig nodi y gall y crynodiad gorau posibl amrywio yn dibynnu ar wahanol systemau mynegiant, proteinau targed, ac amodau arbrofol, felly mae'n well optimeiddio fesul achos.
I grynhoi, mae DTT yn asiant lleihau a ddefnyddir yn gyffredin y gellir ei ddefnyddio i leihau bondiau disulfide mewn proteinau a biomoleciwlau eraill ac i amddiffyn gweithgaredd ensymau a sefydlogrwydd.Fe'i defnyddiwyd yn helaeth mewn arbrofion biocemeg a bioleg moleciwlaidd.
Amser post: Medi-28-2023